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自动核酸提取仪常用的裂解液有哪些?

发布时间:2022-07-06浏览:77次
  自动核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器,核酸提取仪分为两类:一类是大型的自动化的,一般称为自动液体工作站;另一类是小型自动核酸提取仪,利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程。
 
  它是以纳米生物磁珠为载体的一种新型核酸提取技术,核酸分子可与磁珠表面的硅羟基发生特异性识别与结合,在外部磁场的作用下发生聚集或分散,摆脱传统核酸提取过程中离心、抽取上清液等手工操作流程,从而实现核酸的自动化提取。广泛应用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。


  
 

磁珠法核酸提取一般包括裂解、结合、洗涤、洗脱四个主要步骤,每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现,其中裂解环节是决定提取之质量的重中之重,经常也会有老师问到应该如何对裂解液进行优化。那么,我们就来分析一下配置裂解液经常用的试剂及其作用原理。
 
  1、盐酸胍、尿素
 
  盐酸胍在浓度为4-8mol时可断裂氢键,有两种可能机制:1、变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合,形成变性蛋白-变性剂复合物,当复合物被除去,引起N-D反应平衡向右移动,随着变性剂浓度增加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,导致蛋白质完全变性;2、盐酸胍、尿素对氨基酸具有增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,成为非极性残基的较好溶剂,使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,盐酸胍、尿素引起的蛋白变性往往是不可逆的。
 
  2、异硫氰酸胍
 
  蛋白质变性剂,能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。在通常使用的蛋白质变性剂中作用强的是异硫氰酸胍,它们可以使多数蛋白质转换成一种随机的卷曲状态。含有强的阴离子和阳离子基团,它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下,异硫氰酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如SDS存在的情况下,可以破坏疏水作用。

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