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影响全自动核酸纯化仪提取效率的因素

发布时间:2021-09-24浏览:30次
  全自动核酸纯化仪在核酸检测中经常用到,在核酸检测实验室拿到样本之后,进行核酸检测时,首先要做的就是使用全自动核酸纯化仪将样本中的核酸提取出来,提取出的核酸直接关系到后续的检测,一般核酸提取的主要步骤分为四步:裂解、吸附、洗涤和洗脱,每一步出现问题都会影响磁珠的提取效率。
 
  一、样本裂解是裂解细胞或病原体,释放里面的核酸。影响裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的温度和时间。
 
  裂解液成分:对于一些难裂解的样本,可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度来增强裂解液的裂解能力。
 
  裂解温度和时间:提高温度和增加裂解时间可以让细胞裂解更彻底,得到更多核酸,需要摸索合适的温度和时间;温度过高或时间过长,也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。
 
  二、吸附是磁珠吸附核酸的能力,影响吸附能力的有磁珠的吸附能力以及结合缓冲液的结合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面积以及修饰基团的密度影响。可根据实际样本选择磁珠粒径和修饰基团。
 
  三、洗涤是去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质。关系到核酸的纯度,磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。磁棒振荡幅度太小或混合时间太短,有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力。振荡太剧烈或时间太长,会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解,得率下降。
 
  四、洗脱是解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,直接影响核酸得率,影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。磁珠未充分晾干,可能会有醇类等杂质残留,影响后续PCR反应;磁珠过分干燥,核酸可能会干结在磁珠上,导致洗脱效率下降。适当提高洗脱温度和时间,有利于核酸从磁珠上游离下来,时间过长或温度过高,核酸有可能会降解,需要把握其中的平衡。
 
  注意以上四点,利用全自动核酸纯化仪即可完成核酸检测试验。

联系电话:
020-39921409

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