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梯度PCR仪跑胶有问题怎么办?

发布时间:2022-11-11浏览:87次
  梯度PCR仪与普通PCR仪的区别在于温度的控制上面,普通PCR的孔所有温度是一样的,而梯度PCR仪却能够让不同的孔有不同温度,比如横向有12个孔,退火温度可以从低到高。
 
  梯度PCR仪与普通PCR仪的区别主要是在功能上,而功能的体现主要是在温度上,而在性能上的体现确实大大不同的。由于传统的普通PCR仪一次只能运行一个特定的退火温度,因此如果要设置不同的退火温度,那么就需要多次运行才能够实现,这一过程需要花费大量的时间
 
  PCR仪实际就是一个温控设备,能在95℃,55℃,72℃之间很好地进行温度控制,而梯度PCR仪的梯度也要做一下介绍,梯度实际上是指PCR时退火温度条件可以设置一系列不同的温度梯度,因此人们把这样的PCR仪称之为是梯度PCR仪。广泛应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等领域的一款仪器设备,在实验室中的应用频率很高,
 
  PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象。出现这样的问题,则需要进行细致的分析,因为引起该问题的可能很多。可先检查是否模板质量问题,如有降解等,模板应避免反复冻融。
 
  也有可能是抽提RNA时有污染,则需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特异性扩增引发该问题,可提高退火温度,少循环次数。电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换,电泳胶脏了等都可能引发该问题。
 
  如果不是由上述原因引起,则进一步检查加样量是否过大,制胶过程中胶孔是否制好,EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。

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