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光片显微镜怎样获取数据和调整样品的方向?

发布时间:2021-10-13浏览:17次
  光片显微镜的使用体验可能感觉与传统显微镜特别不同,因为大多数设置都是完全数字化的,没有目镜,所以无法通过眼睛快速检查样品的位置和方向。此外,位移台的控制可能与传统显微镜的界面也有很大不同。快速扫描样品整个深度的能力,无需像共聚焦显微镜那样等待扫描完成,使得光片显微镜的工作流程快速且直接。同样,快速的数据获取速度使得实验能够快速连续地进行。然而,快速的数据获取会导致大量数据迅速积累,用户需在谨慎考虑数据存储与数据处理能力的情况下方可进行长时间拍摄。
 
  在普通的宽场荧光显微镜中,安装好的样品被放置在显微镜台上,然后从上面或下面(垂直或倒置)进行照明和检测。光片显微镜由于可以拥有不同的照明路径,给样品的放置增加了另一个自由度,从而允许用户准确定位样品。此外,多组数据可以从不同的路径获得,并拼合在一起,也能使显微镜的穿透深度固定的情况下获得更大的成像范围。同时,在光片显微镜中,样品的放置方向也比经典的单透镜显微镜更为重要。用户需要使样品相对于照明轴和检测轴方向正确:光片需要在不通过样品的高折射或高吸收结构的情况下到达感兴趣的区域。
 
  与传统荧光显微技术不同的是,图像采集过程中的第一个关键步骤是光片的校准。在光片显微镜中,我们需要辨别调整光片的基本参数,即高度和厚度,以及正确地将光片定位在检测透镜的焦平面上。这三个步骤对于获得光片好的层析能力以及可靠性、一致性高的结果都是不可少的。此外,光片的校准和对其参数的了解可能是决定进一步实验策略的关键性先决条件,例如调整轴向的步进和之后的分析步骤。

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